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不同类型ELISA样本的收集与保存方法

发布时间: 2021-07-06  点击次数: 193次

用于做ELISA检测的样本应首先离心除去沉淀物或悬浮物质保证样本澄清透明。为确保实验的准确性和可靠性,保证样品不被降解,建议-20℃或-80℃保存的样本在1-6个月内完成检测,4℃保存的样本在一周内完成检测。

 

一、   液体样本:

1.    血清:PP管(不含热原和内毒素)收集全血,室温自然凝固20-30分钟,或4℃过夜,分离出血清,(适当倾斜离心管以扩大液面的横截面,使血清能更大程度分离出来)。4℃ 2000/分离心20-30分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离,收集上清,立即进行测定。如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃,避免反复冻融,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血清样本应注意避免溶血和细菌污染。

2.    血浆:使用抗凝管或加入抗凝剂(EDTA、柠檬酸钠或肝素)的PP管收集全血,混合10-20分钟,4 2000/分,离心20-30分钟,收集上清,立即进行测定,如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.    尿液、胸腹水、脑脊液、母乳、唾液:用无菌管收集样本,4℃ 2000/分,离心20-30分钟。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

4.    细胞培养上清

1)        胞外:无菌管收集,4 2000/分,离心20-30分钟,除去细胞碎片和杂质,收集上清液备用,样本保存在-20℃或-80℃,避免反复冻融,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2)        胞内:加入裂解液,或用pH7.2-7.4PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100/ml左右,通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,可采用超声波破碎),使细胞膜破坏并释放出细胞内成分,2000/分,离心20-30分钟,收集上清。 

二、   固体样本:

1.    组织标本:标本采集后用液氮迅速冷冻保存备用。使用时切割标本,称取1g左右组织,加入9gpH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。4 2000/分,离心20分钟,仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2.    植物标本:取0.1g新鲜植物组织样本,液氮中充分研磨;加入样品体积9倍的提取液(pH7.2-7.4左右的PBS),4 8000/分离心30分钟,取上清并暂时保存于4℃待用。如需精确提取,可在液氮研磨后加入1ml的提取液(80%甲醇), -20℃过夜后再4 8000/分,离心1小时,取上清;上清液过C-18固相萃取柱,过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;上样前加入pH7.2-7.4左右的PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,48000/分,离心15分钟,取上清并暂时保存于4℃待用。

3.    土壤:称取1g土壤,加入9gpH7.2-7.4左右的PBS,充分混匀。4 2000/分,离心20分钟,仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

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