青旗与您分享人elisa试剂盒的操作方法

　　人elisa试剂盒自从60-70年代问世以来，得到科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。人elisa试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗体ELISA检测。

 

　　人elisa试剂盒的操作方法：

　　双抗体夹心法：

　　1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

　　2、加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。

　　3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

　　5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　间接法：

　　1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

　　2、次日洗涤3次；

　　3、加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤；

　　4、于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

　　5、37℃孵育35-60分钟，洗涤；

　　6、最后一遍用DDW洗涤。

　　其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。