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青旗与您分享人elisa试剂盒的操作方法

发布时间: 2021-09-24  点击次数: 47次
  人elisa试剂盒自从60-70年代问世以来,得到科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。人elisa试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。
 
  人elisa试剂盒的操作方法:
  双抗体夹心法:
  1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
  2、加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。
  3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
  4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
  5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
  间接法:
  1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
  2、次日洗涤3次;
  3、加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
  4、于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
  5、37℃孵育35-60分钟,洗涤;
  6、最后一遍用DDW洗涤。
  其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

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