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关于elisa实验步骤,我们已经为您整理好了

发布时间: 2022-03-22  点击次数: 176次
  elisa是酶联接免疫吸附剂测定的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。
 
  在检测时,受检标本与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体,通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
 
  elisa实验的原理:
  1、包被:抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等免疫活性;
  2、标记:抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点;
  3、显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或抗体结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。
 
  1、从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需酶标板孔数目,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2、标准品和样本加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL,空白孔不加。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、加酶:标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔。
  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。
  5、配液:将20X浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。
  6、洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次。
  7、显色:每孔加入底物A、B各50μL,轻轻震荡混匀后,37℃避光孵育15min。
  8、终止:每孔加入终止液50μL,终止反应,此时蓝色立刻转为黄色。
  9、测定:以空白孔调零,15分钟内在450nm波长处测定各孔的吸光度(OD值)。

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