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ATCC细胞库在细胞培养上主要使用这个方法

发布时间: 2022-10-21  点击次数: 163次
  ATCC细胞库的原理在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
 
  细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
 
  ATCC细胞库培养方法:
  1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
  ①弃去培养上清,用PBS或盐水清洗1-2次;
  ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
  ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
  ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
  ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
  ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
 
  2、细胞复苏:
  ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
  ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
 
  3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
  ①弃去培养上清,用PBS或盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶;
  ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
  ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
  ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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