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有了它,操作白介素elisa试剂盒会更简单

发布时间: 2023-01-12  点击次数: 59次
  白介素elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素水平。用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。
 
  白介素elisa试剂盒的计算:
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
  试剂盒性能:
  1、样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
  2、批内与批见应分别小于9%和11%。
 
  血清elisa试剂盒的操作流程如下:
  1、血清总补体ELISA试剂盒待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  2、酶标板置4℃,包被过夜。
  3、洗板:吸干孔内反应液,产品仅用于科研用洗涤液过洗一遍,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  4、阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
  5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  6、洗板,同(4)。
  7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
  8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  9、洗板,同(4)。
  10、每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
  12、分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  13、数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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