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按这个步骤操作胰岛素elisa试剂盒,既简单又便捷

发布时间: 2022-01-24  点击次数: 195次
  胰岛素elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被胰岛素(INS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  胰岛素elisa试剂盒的准备:
  1、标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀;
  2、洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
 
  胰岛素elisa试剂盒的操作步骤:
  1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。

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