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酶联免疫试剂盒在实验时需要注意哪些要点?

发布时间: 2022-02-24  点击次数: 523次
  酶联免疫试剂盒应严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。首先应选取的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证酶联免疫试剂盒检测结果准确可靠的必要条件。所以酶联免疫试剂盒试剂盒的购买,试剂质量的保证以及实验前实验仪器的检察都是很重要的。
  1、标本的采集及保存:
  ①、血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃经过一夜夜后于1000x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  ②、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  ③、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  ④、样本处理:血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
  
  2、试剂的准备:
  按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂,酶联免疫试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的,自配的缓冲液应用pH计测量较正,从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
  
  3、加样:
  分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  
  4、温育:
  用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  
  5、洗涤:
  小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  
  6、显色:
  每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  
  7、测定:
  以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。