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快看青旗是如何使用ATCC细胞库的!

发布时间: 2022-10-26  点击次数: 31次
  ATCC细胞库通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。但对于国内客户,由于运输时间稍长,都是采用干冰运输的方式。在收到ATCC细胞后,很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO,然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点,需将细胞存储在液氮中(-130℃以下)。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下,这会使细胞存活率迅速下降。
 
  ATCC细胞库的使用方法:
  1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
  取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜,以稳定细胞状态。然后,用75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,收集瓶内液体于50ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用6ml培养基重悬,全部接种到25cm2培养瓶中,再放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多,可以直接1:2分瓶培养。
 
  2、细胞传代:细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离5min,弃上清,用12ml培养基重悬细胞,按1:2的比例进行接种传代,接种到25cm2培养瓶中,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养,2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞NK-92细胞,ATCC细胞,培养技术传代步骤。
 
  3、细胞冻存:
  ①细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=5:4:1)重悬细胞,并放置于冻存管中。
  ②先将细胞冻存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃隔夜,24h后可转入液氮中进行长期保存。
 
  4、细胞复苏:
  ①从液氮中取出细胞冻存管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
  ②将冻存管中的细胞移至含有5ml培养液的15ml离心管中,然后1000rpm/min,离心5min。
  ③弃上清,沉淀细胞用6ml培养基重悬,接种到培养瓶中,zui后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
  ④第二天,换用新鲜培养基继续培养。

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