快看青旗是如何使用ATCC细胞库的！

　　ATCC细胞库通常保存在冻存管中用干冰运输，或是在培养瓶中常温运输。但对于国内客户，由于运输时间稍长，都是采用干冰运输的方式。在收到ATCC细胞后，很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO，然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点，需将细胞存储在液氮中（-130℃以下）。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下，这会使细胞存活率迅速下降。

 

　　ATCC细胞库的使用方法：

　　1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

　　取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜，以稳定细胞状态。然后，用75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，收集瓶内液体于50ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用6ml培养基重悬，全部接种到25cm2培养瓶中，再放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多，可以直接1:2分瓶培养。

 

　　2、细胞传代：细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离5min，弃上清，用12ml培养基重悬细胞，按1:2的比例进行接种传代，接种到25cm2培养瓶中，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞NK-92细胞，ATCC细胞，培养技术传代步骤。

 

　　3、细胞冻存：

　　①细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中。

　　②先将细胞冻存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃隔夜，24h后可转入液氮中进行长期保存。

 

　　4、细胞复苏：

　　①从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

　　②将冻存管中的细胞移至含有5ml培养液的15ml离心管中，然后1000rpm/min，离心5min。

　　③弃上清，沉淀细胞用6ml培养基重悬，接种到培养瓶中，zui后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。

　　④第二天，换用新鲜培养基继续培养。