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BJ5183化学感受态细胞

BJ5183化学感受态细胞

简要描述:BJ5183化学感受态细胞
BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1或pAdeasy-2的重组。

更新时间:2022-01-18

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86020
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

BJ5183化学感受态细胞


产品规格CAT#: BFNC86020-01(10×100ul)/BFNC86020-02(50×100ul)


BJ5183:                                                    100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月)



基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)





产品说明

BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。StrR 赋予BJ5183菌株链霉素抗性。

青旗生物生产的BJ5183感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。


BJ5183化学感受态细胞


操作方法


1. BJ5183感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒(含有目标基因并线性化)和腺病毒质粒,并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项


1. 感受态细胞适宜在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间

存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. BJ5183菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁,纯化质粒。

4. BJ5183感受态细胞对温度敏感,应储存在-80℃超低温冰箱,避免温度波动,温度波动会降低感受态转化效率。




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