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BL21(DE3)感受态细胞

BL21(DE3)感受态细胞

简要描述:BL21(DE3)感受态细胞
非毒性蛋白的高水平表达,可同时用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达;
电转感受态效率达1×1010 cfu/μg DNA,可用于各种多肽,蛋白表达文库的构建

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86067
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

BL21(DE3)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86067-01(10×100ul)/BFNC86067-02(50×100ul)


BL21(DE3):                                               100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)




基因型


F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)


产品说明

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上,所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的BL21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg DNA。


操作方法

1.BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2.42水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YTLB),混匀后37200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YTLB培养基上。

5.将平板倒置放于37培养箱过夜培养。


BL21(DE3)感受态细胞


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。




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