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BL21(DE3)pLysS感受态细胞

BL21(DE3)pLysS感受态细胞

简要描述:BL21(DE3)pLysS感受态细胞
BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86068
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

BL21(DE3)pLysS感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86068-01(10×100ul)/BFNC86068-02(50×100ul)


BL21(DE3)pLysS:                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)




基因型

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr


产品说明

BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。青旗生物生产的BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. BL21(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YTLB),混匀后37200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YTLB培养基上。

5. 将平板倒置放于37培养箱过夜培养。


BL21(DE3)pLysS感受态细胞


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20. Use at 34 µg/ml.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

6. BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。




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