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BL21 Star(DE3)pLysS​感受态细胞

BL21 Star(DE3)pLysS​感受态细胞

简要描述:BL21 Star(DE3)pLysS​感受态细胞
异源蛋白的基础表达水平提高,可同时用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:222

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86071
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86071-01(10×100ul)/BFNC86071-02(50×100ul)


BL21 Star(DE3)pLysS:                               100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)




基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)


产品说明

BL21 Star(DE3)pLysS菌株来源于BL21(DE3),含有rne131突变(RNaseE基因),RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累,增强菌株细胞内mRNA的稳定性,从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌RNA聚合酶,也可用于非T7启动子表达载体(pGEX,pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子,可以和含有 pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。

青旗生物生产的BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。


操作方法

1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。



BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞



IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。




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