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OrigamiB(DE3)感受态细胞

OrigamiB(DE3)感受态细胞

简要描述:OrigamiB(DE3)感受态细胞
OrigamiB(DE3)菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86078
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

OrigamiB(DE3)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86078-01(10×100ul)/BFNC86078-02(50×100ul)


OrigamiB(DE3):                                        100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)



基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)



产品说明

OrigamiB(DE3)菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。 该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,具有卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。

青旗生物生产的OrigamiB (DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Origami B (DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YTLB),混匀后37200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YTLB培养基上。

5. 将平板倒置放于37培养箱过夜培养。


OrigamiB(DE3)感受态细胞


IPTG


Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.  


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。Origami B(DE3) Chemically Competent Cell 产品说明书

6. 具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达.




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