产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 感受态细胞 > 表达感受态细胞 > OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞

OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞

简要描述:OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞
Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶(T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达),适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:136

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86079
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86079-01(10×100ul)/BFNC86079-02(50×100ul)


OrigamiB(DE3)pLysS:                               100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)


基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR




产品说明


Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶(T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达),适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase) (gor),这两个酶是还原途径的关键酶,突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。 此外,该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有氯霉素,卡那霉素抗性质粒的表达。

青旗生物生产的Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. Origami B (DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒,并用手bo打EP 管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。



OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞



IPTG配制:

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素配制

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作,转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

4. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

5. 具有氯霉素,卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有氯霉素,卡那霉素和四环素抗性质粒的表达。




留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

contact us

咨询电话

4006560232

扫一扫,关注我们

返回顶部