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C43(DE3) pLysS感受态细胞

C43(DE3) pLysS感受态细胞

简要描述:C43(DE3) pLysS感受态细胞
OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3),其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86082
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

C43(DE3) pLysS感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86082-01(10×100ul)/BFNC86082-02(50×100ul)


C43(DE3) pLysS:                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)



基因型

FompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)pLysS CamR





产品说明

OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3),其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变,这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白的能力,此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径;OverExpress C43(DE3)来源于OverExpress C41(DE3),是通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入C43(DE3)细胞中即是C43(DE3) pLysS,pLysS表达T7溶菌酶,T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的C43(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. C43(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒,并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的 LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


C43(DE3) pLysS感受态细胞



IPTG配制:

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素配制

         Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.




注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

4. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

5. C43(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。




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