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JM109(DE3)感受态细胞

JM109(DE3)感受态细胞

简要描述:JM109(DE3)感受态细胞
JM109(DE3)菌株来源于JM109,用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于JM109的染色体上,所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86086
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

JM109(DE3)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86086-01(10×100ul)/BFNC86086-02(50×100ul)


JM109(DE3):                                             100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)



基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F´ traD36 proAB laqI qM15](DE3)



产品说明

JM109(DE3)菌株来源于JM109,用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于JM109的染色体上,所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。

青旗生物生产的JM109(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu /μg DNA。



操作方法

1. JM109(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手bo打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

   LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。



JM109(DE3)感受态细胞



IPTG配制:

1 M(mol/L)IPTG(分 子 式: C9H18O5S,分 子 量: 238.30)溶液:称取 2.38 g  IPTG固体,加入8ml ddH2O溶解

补足水到10 ml用0.22um 滤膜过滤除菌,分装即可。


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

4. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。




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