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M15(pREP4)感受态细胞

M15(pREP4)感受态细胞

简要描述:M15(pREP4)感受态细胞
M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒,该质粒通过p15A复制子启动复制,可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带lac I基因,可高效表达lac 抑制蛋白,在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86088
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

M15(pREP4)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86088-01(10×100ul)/BFNC86088-02(50×100ul)


M15(pREP4):                                                   100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期):                                   -80℃(6个月)



基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR




产品说明


M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒,该质粒通过p15A复制子启动复制,可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带lac I基因,可高效表达lac 抑制蛋白,在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株,特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5 启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。

青旗生物生产的M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达2×108cfu/μg DNA。



操作方法

1. M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手bo打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上(若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养,M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时,需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。



M15(pREP4)感受态细胞


IPTG配制:

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.




注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时,需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。




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