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HT115(DE3)感受态细胞

HT115(DE3)感受态细胞

简要描述:HT115(DE3)感受态细胞
HT115(DE3)菌株是一类特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,可以饲喂线虫,主要用于秀丽隐杆线虫(C. elegans)的RNAi干扰试验。该菌株可以在LB或2YT培养基中正常生长,Tn10转座子的存在使其具有四环素抗性。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86089
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

HT115(DE3)感受态细胞


产品规格CAT#: BFNC86089-01(10×100ul)/BFNC86089-02(50×100ul)


HT115(DE3):                                                    100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期):                                   -80℃(6个月)



基因型

F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)


产品说明

HT115(DE3)菌株是一类特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,可以饲喂线虫,主要用于秀丽隐杆线虫(C. elegans)的RNAi干扰试验。该菌株可以在LB或2YT培养基中正常生长,Tn10转座子的存在使其具有四环素抗性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,在IPTG存在时可诱导T7 RNA聚合酶大量表达,进而启动线虫ds RNA的表达),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,除了用于线虫RNAi干扰试验,也可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的HT115(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达0.5×108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. HT115(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


HT115(DE3)感受态细胞


IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.




注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可根据实验选择使用(0.1-10mM)。

4. 进行线虫RNAi质粒转化时,抗生素使用浓度可参考:氨苄—50ug/ml,四环素—12.5ug/ml。

5. 若进行蛋白表达,为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。




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