产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 感受态细胞 > 发根农杆菌感受态细胞 > K599电转感受态细胞
K599电转感受态细胞

K599电转感受态细胞

简要描述:K599电转感受态细胞
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599发根农杆菌(NCPPB2659)含有pRi2659农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(葫芦科,豆科,茄科等),同时具有链霉素抗性。

更新时间:2022-01-21

厂商性质:生产厂家

浏览次数:806

详情介绍
品牌其他品牌货号BFNC86115
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

K599电转感受态细胞


产品规格CAT#: BFNC86115-01(10×100ul)/BFNC86115-02(50×100ul)
K599 Electro:                                                             50μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl ):                 10μl
保存条件(保质期):                                          -80℃(12个月)


基因型

Agrobacterium rhizogenes (strR ) pRi2659 (agropine type)



产品说明


发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599发根农杆菌(NCPPB2659)含有pRi2659农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(葫芦科,豆科,茄科等),同时具有链霉素抗性。

青旗生物生产的K599电转感受态特别适用于大质粒的转化,感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率>105 cfu/μg DNA;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40 kb)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。


常规操作方法

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1 μg质粒DNA(体积不大于6ul,尽量用试剂盒抽提,双蒸水溶解;转化效率较高,*使用前尽量做预实验确定所加质粒的量),用手bo打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。

3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯从冰中拿出,吸水纸吸干外表面水份,快速放入电转槽中,启动电击,电击完成快速插入冰中,加入1 ml无抗生素的TY,并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天



K599电转感受态细胞



农杆菌相关抗生素配方:


抗生素

 配方

 原液

 工作液

羧苄青霉素 (carb)

 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

硫酸卡那霉素 (kan)

 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

链霉素 (strep)

 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

50 μg/ml

利福平 (rif)

DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

20 μg/ml

庆大霉素 (gent)

 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

20 mg/ml

40 μg/ml

氯霉素(cam

 无水乙醇溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

34 mg/ml

34 ug/ml


常用农杆菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

农杆菌菌株

羧苄青霉素(carb)

链霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar.Qual

S

R

S

R

S

C58C1

S

R

R

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

K599

S

R

S

S

S

Ar.1193

R

R

R

S

S



● TY配方(1L):


Tryptone                5g

Yeast extract          3g

补水到1L体积,*溶解后,121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。



注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2. 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或终用于涂板的菌量。

4. K599具有链霉素抗性,不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。




留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7