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Ar.A4感受态细胞

Ar.A4感受态细胞

简要描述:Ar.A4感受态细胞
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。

更新时间:2021-10-18

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86247/BFNC86248/BFNC86249
规格10x100ul/50x100ul/100x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

Ar.A4克隆感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86247(10×100ul)/BFNC86248(50×100ul)/BFNC86249(100×100ul)
Ar.A4:                                                                      100μl/支
pK7WGF2(control vector,10ng/μl )                            10μl
保存条件(保质期):                                         -80℃(12个月)

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。

青旗生物生产的Ar.A4感受态细胞经特殊工艺制作,pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测,转化效率>104 cfu/μg DNA。

常规操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,*使用前尽量做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈bo打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3. 冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基,于 28℃振荡培养 2小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

● 农杆菌相关抗生素配方:

 

  抗生素

  配方

  原液

  工作液

  羧苄青霉素 (carb)

  双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

  硫酸卡那霉素 (kan)

  双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

  链霉素 (strep)

  双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

 10 mg/ml

 50 μg/ml

  利福平 (rif)

 DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

 10 mg/ml

 20 μg/ml

  庆大霉素 (gent)

  双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 

 20 mg/ml

 40 μg/ml

  氯霉素(cam)

  无水乙醇溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

 34 mg/ml

 34 ug/ml

 

常用农杆菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

 

农杆菌菌株

羧苄青霉素(carb)

链霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar.Qual

S

R

S

R

S

C58C1

S

R

R

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

K599

S

R

S

S

S

Ar.1193

R

R

R

S

S

 

● TY配方(1L):

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

补水到1L体积,完全溶解后,121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速bo打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。



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