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elisa实验步骤

elisa实验步骤

简要描述:elisa实验步骤
青旗(上海)生物技术发展有限公司,总部位于上海浦东新区,依托本地高校资源,逐步发展成为以生物技术为主的研发、生产、培训为一体的综合化产业平台,公司在标准化细胞库建立及细胞药物前端模型方面成果显著。我们秉承对用户负责的态度,以对科研的高度严谨,以严格的质量控制,为广大生物医学科研用户提供更优质的服务!

更新时间:2021-07-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

一、elisa实验步骤介绍

  样品收集、处理方法

  1、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,室温血液自然凝固10-20分钟,2000-3000rpm离心20分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离,收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

  2、血浆:根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂。混合10-20分钟后,2000-3000rpm离心20分钟。收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

  3、细胞上清液:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。2000-3000rpm离心20分钟,收集上清。

  4、组织匀浆:标本采集后用液氮迅速冷冻保存备用。使用时取适量标本,加入一定量的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分后,2000-3000rpm离心20分钟,收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

二、样品保存

  如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  实验步骤

  1、从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需酶标板孔数目,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2、标准品和样本加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL,空白孔不加。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3、加酶:标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔。

  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。

  5、配液:将20X浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。

  6、洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  [洗板方法]

  手工洗板:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,酶标板倒扣在吸水纸上拍干,反复5次。

  自动洗板:每孔注入洗液350μL,浸泡1分钟,洗板5次。

  7、显色:每孔加入底物A、B各50μL,轻轻震荡混匀后,37℃避光孵育15min。

  8、终止:每孔加入终止液50μL,终止反应,此时蓝色立刻转为黄色。

  9、测定:以空白孔调零,15分钟内在450nm波长处测定各孔的吸光度(OD值)。

三、elisa实验结果计算

  绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度。或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

四、elisa实验步骤注意事项

  1、试剂盒保存在2–8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,属于正常现象,可水浴加热使结晶完全溶解后再使用。初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

  2、要严格避免操作过程中酶标板干燥,干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。

  3、禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

  4、本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板,用户可按需求使用;剩余的酶标板请放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

  5、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

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