酶联免疫吸附实验

一、   酶联免疫吸附实验液体样本：

1.    血清：PP管（不含热原和内毒素）收集全血，室温自然凝固20-30分钟，或4℃过夜，分离出血清，（适当倾斜离心管以扩大液面的横截面，使血清能更大程度分离出来）。4℃ 2000转/分离心20-30分钟，将血清和红细胞迅速小心地分离，收集上清，立即进行测定。如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血清样本应注意避免溶血和细菌污染。

2.    血浆：使用抗凝管或加入抗凝剂（EDTA、柠檬酸钠或肝素）的PP管收集全血，混合10-20分钟，4℃ 2000转/分，离心20-30分钟，收集上清，立即进行测定，如暂不检测可将收集的血清分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.    尿液、胸腹水、脑脊液、母乳、唾液：用无菌管收集样本，4℃ 2000转/分，离心20-30分钟。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4.    细胞培养上清：

1)        胞外：无菌管收集，4℃ 2000转/分，离心20-30分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2)        胞内：加入裂解液，或用pH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，可采用超声波破碎），使细胞膜破坏并释放出细胞内成分，2000转/分，离心20-30分钟，收集上清。

二、酶联免疫吸附实验固体样本：

1.    组织标本：标本采集后用液氮迅速冷冻保存备用。使用时切割标本，称取1g左右组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。4℃ 2000转/分，离心20分钟，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2.    植物标本：取0.1g新鲜植物组织样本，液氮中充分研磨；加入样品体积9倍的提取液（pH7.2-7.4左右的PBS），4℃ 8000转/分离心30分钟，取上清并暂时保存于4℃待用。如需精确提取，可在液氮研磨后加入1ml的提取液（80%甲醇）, -20℃过夜后再4℃ 8000转/分，离心1小时，取上清；上清液过C-18固相萃取柱，过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；上样前加入pH7.2-7.4左右的PBS缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，4℃8000转/分，离心15分钟，取上清并暂时保存于4℃待用。

3.    土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，充分混匀。4℃ 2000转/分，离心20分钟，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。