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克隆感受态细胞

克隆感受态细胞

简要描述:青旗生物提供一百余种基因型不同的克隆感受态细胞,满足您的各种分子生物学实验需求,如:普通质粒构建、蓝白斑筛选、大质粒构建、易重组质粒构建、慢病毒和腺病毒载体构建、甲基化DNA克隆、高质量质粒提取、文库构建等。
同时我们还提供多种电击感受态细胞,为大质粒构建、高效率转化和文库构建提供方便。

更新时间:2021-07-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

一、克隆感受态细胞基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

二、产品说明

DH5α菌株是实验室常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA 的稳定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。DH5α感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

三、克隆感受态细胞操作方法

1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。

四、注意事项

1. 感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。







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