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elisa实验步骤:探究生物分子的检测与定量分析

发布时间: 2023-09-24  点击次数: 617次
  elisa(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)是一种常用于生物分子检测与定量分析的实验技术。它通过利用酶标记的抗体与特定目标物相互作用,再通过酶促反应产生的颜色变化来定量测量目标物的存在量。下面将介绍elisa实验的基本步骤。
 
  第一步:涂覆抗原
  将待检测的抗原或抗原相关的分子均匀地涂覆在微孔板的孔底表面上。这个抗原可以是蛋白质、多肽、糖类等生物分子。
 
  第二步:阻断
  为了防止非特异性的背景信号,需要在涂覆抗原后加入阻断剂,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,来覆盖微孔板上未被涂覆的表面。
 

 

  第三步:加入样品和对照
  加入待检测的样品或标准溶液到微孔板中,同时设立阳性对照和阴性对照。阳性对照含有已知浓度的目标物,而阴性对照则不含目标物。
 
  第四步:孵育
  将微孔板盖上,置于恒温箱或孵化器中,在适当的温度下进行孵育。孵育的目的是让待检测样品中的目标物与已涂覆在孔底上的抗原相互结合。
 
  第五步:洗涤
  在孵育结束后,使用洗涤缓冲液反复洗涤微孔板,以去除未结合的样品和非特异性的成分。
 
  第六步:加入检测抗体
  加入酶标记的检测抗体,该抗体能与目标物形成免疫复合物。该抗体一般与酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记结合,以便在后续步骤中通过酶促反应来检测目标物的存在。
 
  第七步:再次洗涤
  用洗涤缓冲液洗涤微孔板,去除未结合的检测抗体。
 
  第八步:加入底物
  加入适当的底物溶液,底物会与酶发生反应,并在酶的作用下产生可见的颜色。底物的种类和酶的选择取决于所使用的检测方法和设备。
 
  第九步:反应停止
  通过加入一种停止液或改变反应条件,停止底物的反应。这将阻止颜色的继续发展,并固定目标物的信号。
 
  第十步:测量与分析
  使用光谱仪、酶标仪等设备对微孔板中各孔的颜色强度进行测量。利用已建立的标准曲线,可以根据样品的颜色强度确定目标物的浓度。
 
  elisa实验是一种常用的生物分子检测和定量分析方法,广泛应用于医学诊断、生物学研究、药物开发等领域。通过合理的实验设计和严格的操作,elisa实验可以提供可靠、准确的生物分子定量结果,为科学研究和医学诊断提供有力支持。