Tuner（DE3）pLysS感受态细胞

Tuner(DE3)pLysS感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86084-01(10×100ul)/BFNC86084-02(50×100ul)

Tuner(DE3)pLysS：                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS Cam^R

产品说明

Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Tuner(DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

Tuner(DE3)pLysS感受态细胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素配制

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10 mM均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

5. Tuner(DE3) pLysS 菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。