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Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞

Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞

简要描述:Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞
Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21,Tuner,Origami和 Rosetta四种菌株的优点。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:155

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86075
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86075-01(10×100ul)/BFNC86075-02(50×100ul)


Rosetta-gami B(DE3):                             100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)


基因型

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)



产品说明

Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21,Tuner,Origami和 Rosetta四种菌株的优点:


lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其Tuner菌株的优点——IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,产生更加严格、均一的浓度依赖。

pRARE赋予其Rosetta菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。

gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它们是还原途径的两个关键酶,其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。

该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。

Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素,氯霉素,四环素抗性,由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. Rosetta-gamiB(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。



Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞



IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

6. 具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。




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