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Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞

简要描述:Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
兼具 Rosetta菌株和Origami菌株的优点,同时增强蛋白的可溶性。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:106

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86074
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86074-01(10×100ul)/BFNC86074-02(50×100ul)

Rosetta-gami(DE3)pLysS:                        100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)



基因型

Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)





产品说明

Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表达菌株的优势:



Rosetta-gami赋予其 Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平,并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它们是还原途径的两个关键酶,其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。

该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。

该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株具有卡那霉素,氯霉素,链霉素,四环素抗性,为亮氨酸生长缺陷型菌株。


青旗生物生产的Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞



IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

6. Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

7. 具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。




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