产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 感受态细胞 > 表达感受态细胞 > Rosetta 2(DE3)感受态细胞
Rosetta 2(DE3)感受态细胞

Rosetta 2(DE3)感受态细胞

简要描述:Rosetta 2(DE3)感受态细胞
pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:159

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86077
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

Rosetta 2(DE3)感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86077-01(10×100ul)/BFNC86077-02(50×100ul)


Rosetta 2(DE3):                                               100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期):                                   -80℃(6个月)



基因型


F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm (DE3) pRARE2 (CamR)





产品说明

Rosetta 2(DE3)菌株来源于BL21,是BL21的衍生菌株,为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21 (DE3)细胞中即是Rosetta 2(DE3),pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的Rosetta 2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Rosetta 2(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。




Rosetta 2(DE3)感受态细胞



IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.





氯霉素配制

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.






注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。

4. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

5. Rosetta 2(DE3) 菌株携带 pRARE2质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。





留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

contact us

咨询电话

4006560232

扫一扫,关注我们

返回顶部