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ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞

ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞

简要描述:ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞
可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60,降低包涵体的形成,增加可溶蛋白的表达量及生物活性。

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

浏览次数:175

详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86091
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86091-01(10×100ul)/BFNC86091-02(50×100ul)


ArcticExpress (DE3) pRARE2:                         100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期):                                   -80℃(6个月)



基因型


E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)




产品说明


ArcticExpress (DE3) pRARE2来源于ArcticExpress (DE3),将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四环素,庆大霉素,氯霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时,pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。

青旗生物生产的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg DNA。


操作方法

1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒,并用手bo打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上((平板中务必同时含有34ug/ml的氯霉素,40ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素;若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养


ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞


IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.





注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株携带 pRARE2质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/mllv霉素、40ug/ml的qing大霉素,以防质粒丢失。

3. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性,不可用于具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性质粒的转化。




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