SHuffle T7 E. coli感受态细胞

SHuffle T7 E. coli感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86093-01(10×100ul)/BFNC86093-02(50×100ul)

SHuffle T7 E. coli：                                           100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期)：                                   -80℃（6个月）

基因型

F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (Spec^R, laclq) ΔtrxBrpsL150(Str^R)Δgor Δ(malF)3

产品说明

SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶 DsbC基因 ，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E. coli菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA 聚合酶基因，可以表达噬菌体T7 RNA聚合酶，适合于T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E. coli菌株具有抗T1 噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。

青旗生物生产的SHuffle T7 E. coli感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. SHuffle T7 E. coli感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

SHuffle T7 E. coli感受态细胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10 mM均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

5. SHuffle T7 E. coli 菌株具有链霉素，壮观霉素抗性，不可用于具有链霉素，壮观霉素抗性质粒的转化。