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BL21感受态细胞

BL21感受态细胞

简要描述:BL21感受态细胞
非毒性蛋白的高水平表达,不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如pET系列)

更新时间:2022-01-20

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86066
规格10x100ul/50x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

BL21感受态细胞


产品规格CAT#: BFNC86066-01(10×100ul)/BFNC86066-02(50×100ul)


BL21:                                                         100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月)




基因型

E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12S)


产品说明

BL21是早开发的用于原核表达的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达,不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如:pET系列);但含有大肠杆菌RNA聚合酶,可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如:pGEX,pMAL质粒)。

青旗生物生产的BL21感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg DNA。



BL21感受态细胞


操作方法

1. BL21感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.


注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。




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