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LBA4404感受态细胞

LBA4404感受态细胞

简要描述:LBA4404感受态细胞
LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。

更新时间:2022-01-21

厂商性质:生产厂家

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详情介绍
品牌自营品牌货号BFNC86102
规格10x100ul/50x100ul/100x100ul供货周期现货
主要用途仅用于科研应用领域医疗卫生,生物产业

LBA4404感受态细胞



产品规格CAT#: BFNC86102-01(10×100ul)/BFNC86102-02(50×100ul) /BFNC86102-03(100×100ul)

LBA4404:                                                                 100μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
保存条件(保质期):                                         -80℃(12个月)



基因型

Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine





产品说明


LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 pAL4404型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。

青旗生物生产的LBA4404化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。


操作方法

1. -80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入 冰中。

2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,*使用前尽量做预实验确定所加质粒的量),用手bo打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3. 加入700 μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3

(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 时,需28培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28培养72-90 h)。


LBA4404感受态细胞


备注

1、农杆菌相关抗生素配方:

抗生素

配方

原液

工作液

羧苄青霉素(carb

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

硫酸卡那霉素(kan

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

链霉素(strep

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

50 μg/ml

利福平(rif

DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

20 μg/ml

庆大霉素(gent

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

20 mg/ml

40 μg/ml


2、常用农杆菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

农杆菌菌株

羧苄青霉素(carb)

链霉素(strep)

利福平(rif)

庆大霉素(gent)

硫酸卡那霉素(kan)

AGL-1

R

S

R

S

S

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S


3LBYEB配方:

component

LB(液体)/L

LB(固体)/L

component

YEB(液体)/L

YEB(固体)/L

Tryptone

10 g

10 g

Tryptone

5 g

5 g

Yeast extract

5 g

5 g

Yeast extract

1 g

1 g

NaCl

10 g

10 g

牛肉浸膏

5 g

5 g

NaOH

PH7.0

PH7.0

蔗糖

5 g

5 g

Agar

15 g

MgSO4*7H2O

0.49 g

0.49 g




NaOH

PH7.0

PH7.0




Agar

15 g



注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。


2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

产品规格CAT#: BFNC86205(10×100ul)/BFNC86206(50×100ul) /BFNC86207(100×100ul)





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